吸光光度法（紫外/可见光谱）讲座（10）(页 1) - 『分析仪器』 - 生化分析仪器网【仪器论坛】

阳光发表于 2004-3-28 00:00

吸光光度法（紫外/可见光谱）讲座（10）

<H2 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; LINE-HEIGHT: 200%; TEXT-ALIGN: center; mso-layout-grid-align: none" align=center>吸光光度法（紫外/可见光谱）讲座（10） ――提高吸光光度法灵敏度和选择性的某些途径<?xml:namespace prefix = o /><o:p></o:p></H2>
 <o:p></o:p>

1.2.5.1 示差吸光光度法<o:p></o:p>

示差吸光光度法是用一已知浓度的标准显色溶液与未知试样的显色溶液相比较，测量吸光度，从测得的吸光度求未知浓度。<o:p></o:p>

设标准溶液的浓度为c，试样溶液的浓度为cx，则 <?xml:namespace prefix = v ns = "urn:schemas-microsoft-com:vml" /><?xml:namespace prefix = v /><v:shapetype id=_x0000_t75 coordsize="21600,21600" o:spt="75" o:preferrelative="t" path="m@4@5l@4@11@9@11@9@5xe" filled="f" stroked="f"><v:stroke joinstyle="miter"></v:stroke><v:formulas><v:f eqn="if lineDrawn pixelLineWidth 0"></v:f><v:f eqn="sum @0 1 0"></v:f><v:f eqn="sum 0 0 @1"></v:f><v:f eqn="prod @2 1 2"></v:f><v:f eqn="prod @3 21600 pixelWidth"></v:f><v:f eqn="prod @3 21600 pixelHeight"></v:f><v:f eqn="sum @0 0 1"></v:f><v:f eqn="prod @6 1 2"></v:f><v:f eqn="prod @7 21600 pixelWidth"></v:f><v:f eqn="sum @8 21600 0"></v:f><v:f eqn="prod @7 21600 pixelHeight"></v:f><v:f eqn="sum @10 21600 0"></v:f></v:formulas><v:path o:extrusionok="f" gradientshapeok="t" o:connecttype="rect"></v:path><o:lock v:ext="edit" aspectratio="t"></o:lock></v:shapetype><v:shape id=_x0000_i1025 style="WIDTH: 92.25pt; HEIGHT: 33.75pt" o:ole="" type="#_x0000_t75"><v:imagedata src="file:///C:/WINDOWS/TEMP/msoclip1/04/clip_image001.wmz" o:title=""></v:imagedata></v:shape>

A0=-－lg(I/I0)=abc<o:p></o:p>

<SPAN lang=EN-US style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: ^Times New Roman^; mso-bidi-font-size: 10.0pt; mso-fareast-font-family: 宋体; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA">A<SPAN lang=EN-US style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: ^Times New Roman^; mso-bidi-font-size: 10.0pt; mso-fareast-font-family: 宋体; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA">x<SPAN lang=EN-US style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: ^Times New Roman^; mso-bidi-font-size: 10.0pt; mso-fareast-font-family: 宋体; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA">=-<SPAN style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-bidi-font-size: 10.0pt; mso-ascii-font-family: ^Times New Roman^; mso-hansi-font-family: ^Times New Roman^; mso-bidi-font-family: ^Times New Roman^; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA">－<SPAN lang=EN-US style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: ^Times New Roman^; mso-bidi-font-size: 10.0pt; mso-fareast-font-family: 宋体; mso-ansi-language: EN-US; mso-fareast-language: ZH-CN; mso-bidi-language: AR-SA">lg(Ix/I0)=abcx<o:p></o:p>

<o:p></o:p>

lgI0－lgI＋lgIx－lg I0＝abc－abcx<o:p></o:p>

lgIx－lg I＝ab（c－cx）<o:p></o:p>

A差＝－lg（Ix / I）＝ab（c－cx） （1-36）<o:p></o:p>

以A差对（c－cx）作图，可以求出c－cx，c为已知，则cx可求得。按所选择测量条件不同，示差吸光光度法有三种操作方法：<o:p></o:p>

（l）高吸光度法。光电检测器未受光时，其透光度为零，光通过一个比试样溶液稍稀的参比溶液后照到光电检测器上，调其透光度（T）为100％，然后测定试样溶液的吸光度。此法适用于高含量测定。<o:p></o:p>

（2）低吸光度法。先用空白溶液调透光度为100％，然后用一个比试样溶液稍浓的参比溶液，调节透光度为零，再测定试样溶液的吸光度。此法适用于痕量物质的测定。<o:p></o:p>

（3）双参比法。选择两个组分相同而浓度不同的溶液作参比溶液（试样溶液浓度应介于两溶液浓度之间），调节仪器，使浓度较大的参比溶液的透光度为零，而浓度较小的参比溶液的透光度为100％，然后测定试样溶液的吸光度。<o:p></o:p>

示差吸光光度法可以提高光度法的精确性，从而实现用吸光光度法对物质中某一含量较高或较低的组分的测定。例如对高含量成分的测定，有时可达到与重量法、滴定法同等的精确度。其降低分析误差的主要依据就是对刻度标尺的放大作用。例如，假定用普通光度法测量参比溶液的透光度为10％，试样溶液的透光度为 7％，仅相差 3％。若用示差法，将参比溶液的透光度调到100％，则试样溶液的透光度为70％，两者之差增为30％，相当于放大读数标尺10倍。从而相对地增大了这种测量方法的精确性（图1-4）。<o:p></o:p>

在示差吸光光度法的测量中，要求一个实际具有较高吸收的参比溶液的表观刻度读数为A＝0或T＝100％，故所用的仪器必须具有出光狭缝可以调节，光度计灵敏度可以控制或光源强度可以改变等性能。<o:p></o:p>

 <IMG height=416 src="http://www.instrument.com.cn/images/Article/2900.jpg" width=400> <o:p></o:p>

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图1-4 不同测量方法的示差吸光光度法的精确性<o:p></o:p>

Figure 1-4 The accuracy of differential spectrophotometry with different measurement methods

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吸光光度法（紫外/可见光谱）讲座（10）