吸光光度法（紫外/可见光谱）讲座（12）(页 1) - 『分析仪器』 - 生化分析仪器网【仪器论坛】

阳光发表于 2004-3-28 00:00

吸光光度法（紫外/可见光谱）讲座（12）

<H3 style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; LINE-HEIGHT: 150%; TEXT-ALIGN: center; mso-layout-grid-align: none" align=center>――提高吸光光度法灵敏度和选择性的某些途径<?xml:namespace prefix = o /><o:p></o:p></H3>
 <o:p></o:p>

3 导数吸光光度法<o:p></o:p>

在普通吸光光度法中，如果吸光度很小，就不能得到精度很好的信号。如果其他组分的吸收重叠在吸收峰上，测定就会受干扰。导数吸光光度法有可能克服这些困难。<o:p></o:p>

其原理是因为吸光度和摩尔吸光系数为波长的函数，所以朗伯-比尔定律可以用下式表示：<o:p></o:p>

Aλ＝ελcl<o:p></o:p>

将上式对波长进行一次微分，得<o:p></o:p>

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若对波长进行n次微分，可得

<o:p><IMG height=55 src="http://www.instrument.com.cn/images/Article/2910.jpg" width=126></o:p>

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由此可知，吸光度对波长进行微分的微分值与吸收物质的浓度之间符合朗伯-比尔定律，因此它可以用于吸收物质的定量分析。<o:p></o:p>

获得微分光谱的方法可分为光学微分法和电学微分法两类，后者已在多种类型的微机控制分光光度计中得到了应用，它通常可以获得一、二、三、四阶导数光谱。<o:p></o:p>

导数光谱的测量有多种方法：<o:p></o:p>

（1）如果基线是平坦的，可以测量峰-谷之间的距离，这是最常用的方法。<o:p></o:p>

（2）在基线平坦的情况下，也可以测量峰-基线之间的距离，这时灵敏度虽有些降低，但精度较高。<o:p></o:p>

（3）作两峰的连接线，测量两峰连线到谷的距离。只要基线是直线，不管它是否倾斜，总能得到正确的值。<o:p></o:p>

（4）作峰顶与谷顶的切线，使其平行于基线，然后测量两平行线的距离。<o:p></o:p>

关于导数吸光光度法提高灵敏度的规律，有人指出n阶（n＝1～4）导数吸光光度法的灵敏度是按4.5n倍增大。<o:p></o:p>

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