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Xeno-Free人间充质干细胞培养基(无酚红)
产品基本信息
产品名称 | Applied Cell®Xeno-Free人间充质干细胞培养基（无酚红） |
货 号 | AC-1001003PRF |
规 格 | 基础培养基450mL，添加剂50mL |
运输保存条件 | 基础培养基2-8℃，添加剂-20℃至-80℃；混合后2-8℃ |
使用范围 | 人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞 原代分离、扩增与传代培养 |
保质期 | 12个月 |
产品简介
Xeno-Free人间充质干细胞培养基（无酚红）是埃泽思生物（Applied Cell®）自主研发的一款无外源动物成分的人间充质干细胞培养基。可应用于人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养，并保持其多向分化潜能。本产品内毒素水平远低于中国药典标准，生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。
Xeno-Free人间充质干细胞培养基主要成分：氨基酸，维生素、无机盐、白蛋白，转铁蛋白、胰岛素、微量元素，细胞因子等。
产品特性
l 无外源动物蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。
l 全程无血清生产，极大降低批次间差异。
l 可用于原代分离，且培养过程无需包被培养板。
l 扩增效率高，24h左右增殖翻倍，节省培养时间。
l 内毒素<0.06EU/ml，远低于中国药典水平
组分 | 规格 | 数量 | 运输 |
Human Mesenchymal Stem Cell Basal Medium 人间充质干细胞基础培养基 | 450mL | 1瓶 | 冰袋 |
Human Mesenchymal Stem Cell Supplement 人间充质干细胞添加剂 | 50mL | 1瓶 | 干冰 |
产品内容
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Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024/1001025 ）
实验准备
人间充质干细胞培养基配制
1.1 37℃快速解冻人间充质干细胞培养基添加剂，快速溶解时不易破坏添加剂中营养物质，时间大致为10min。待添加剂融化后摇匀，分装或直接按比例添加到基础培养基中，分装后添加剂立即储存于-20℃至-80℃，避免反复冻融 。
1.2将添加剂以10%比例加入到人间充质干细胞基础培养基中，混匀，即为人间充质干细胞培养基（AC-1001003PRF）。混合后培养基可在2-8℃ 稳定储存2-3周，不建议使用已配制超过3周的培养基。
1.3人间充质干细胞培养基可直接应用于人类骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养。
操作方法(以下步骤皆应在无菌条件下操作)
hMSC细胞复苏(10cm dish)
2.1 从液氮中取出冻存的hMSC细胞，迅速将冻存管放入37℃水浴快速融解。
2.2 在生物安全柜或超净台中，将解冻后的细胞悬液缓慢加入5 mL预温的人间充质干细胞培养基（AC-1001003PRF）。
2.3 1000rpm 离心3 min，吸掉上清，加入10mL人间充质干细胞培养基重悬细胞。
2.4 将细胞均匀铺到培养皿中，水平十字振动培养皿使细胞均匀分布，5% CO2的37℃恒温细胞培养箱中培养24小时后观察细胞状态。
2.5 24h后更换新鲜人间充质干细胞培养基继续培养，每2-3天更换培养液。
hMSC细胞传代培养
1. 在显微镜下观察细胞，当细胞融合度达到90%，即可传代。
2. 在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。
3. 室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
4. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
5. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min。
6. 弃上清，加入人间充质干细胞培养基，重悬细胞，计数。1：3-1：4比例传代，或按1-2x104 cells/cm2 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培养箱中培养。
注意：细胞传代所需的时间：2-4天。5代及之前的细胞，生长速度较快。5代以后的细胞，生长速度稍缓。
hMSC细胞冻存
1. 细胞达到90%汇合度， 吸掉原有培养基，PBS清洗一次。
2. 加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底，室温孵育4-5min或37℃孵育2-4min分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
3. 加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液枪轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
4. 将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min，吸掉上清。
5. 加入适量Serum-Free细胞冻存液（AC-1001005/1001006），调整细胞冻存密度在1×106 cells/mL左右，每支冻存管分装1.5-2ml。
6. 直接放入-80℃，24h后转入液氮中长期保存。
细胞形态图
间充质干细胞形态图
成骨分化 脂肪分化 软骨分化
质量控制
检验项目 Test Catagories | 参考数据 Reference Data | 结果 The results |
外观 Physical APPearance | 无色液体 Colorless liquid | 符合规定 Conform to the provisions |
澄清度 Clarity | 澄清 Clear | 符合规定 Conform to the provisions |
pH值 Ph value | 6.9-7.3 | 符合规定 Conform to the provisions |
渗透压 Osmolality | 270-340 （mosm/KgH2O） | 符合规定 Conform to the provisions |
细菌内毒素 Endotoxin | 小于0.06 EU/ml | 符合规定 Conform to the provisions |
无菌 Sterility | 无菌 Sterility | 符合规定 Conform to the provisions |
支原体 Mycoplasma | 0.11um过滤，支原体试验为阴性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration | 符合规定 Conform to the provisions |
细胞生长试验 Cell growth test | 细胞为梭形，呈指纹状或螺旋状生长 The cells are spindle - shaped, fingerlike or spiral | 符合规定 Conform to the provisions |