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细胞划痕实验介绍

   日期:2022-12-08     浏览:45    
核心提示:一、实验原理细胞划痕(woundhealing)法是简捷测定细胞迁移远动和修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培

一、实验原理

 

细胞划痕(wound healing)法是简捷测定细胞迁移远动和修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区修复能力的不同可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

 

二、实验步骤

1.所有要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min。
2.
  1)先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,大约每隔0.5-1cm一道,横穿过孔,每孔至少穿过5条线。
  2)在空中加入约 5×105个细胞(具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满),37°C培养箱培养。
  3)第二天用10µl枪头比着直尺,与标记线垂直的方向划两条平行线,枪头要垂直,不能倾斜。
  4)用PBS洗细胞3次,去除划下的细胞,加入无血清培养基。

 

三、注意事项

1.在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴璧细胞,影响实验拍照结果。
2.一般做划痕实验,都是无血清或者低血清(<2%),否则细胞增殖就不能忽略。(也可用丝裂酶处理一小时)
3.按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成者干交叉点,作为固定的检
测点,以解决前后观察时位置不固定的问题。

 


 
 
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