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重组蛋白的常见问题汇总

   日期:2022-12-14     浏览:45    
核心提示:1.蛋白为什么要冻干?冻干对蛋白的影响有哪些?蛋白质对热敏感,冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来,提高蛋白的稳定性并延长

1.蛋白为什么要冻干?冻干对蛋白的影响有哪些?
蛋白质对热敏感,冻干能使绝大部分蛋白质的活性保留下来,提高蛋白的稳定性并延长保存时间,同时降低运费。

 2.冻干前为什么向蛋白溶液中加保护剂?一般冻干保护剂有哪几种?
保护剂是用来在冻干和储存过程中保护蛋白的。常用的保护剂或稳定剂有糖类,多元醇,聚合物,表面活性剂,某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集;甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂,可以降低某些蛋白的冻干后聚集情况。

温馨提示:对于大多数蛋白,重悬后在4℃仅能短期保存(约1周)。如想长期保存,请先配制成稀释液(其中必须含有载体蛋白,如0.1% BSA,5%HSA,或10% FBS),然后分装冻存于-20℃或-80℃。一定要避免反复冻融,因每次冻融均会引起蛋白的部分失活。

 3.如何重构冻干粉?
请查看您的货物随附的分析证书以获取有关重构的确切说明,因为并非所有产品都在相同条件下重构。一般来说,我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中,轻轻摇晃以完全溶解蛋白质。不要涡旋。

 4.为什么我的管内几乎看不见蛋白产品?
蛋白产品中不含载体蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA),人血清白蛋白(HSA)和蔗糖等,并以最低含盐量的溶液进行冻干时,常常不能形成白色网架结构,而是微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内,形成很薄或肉眼不可见的透明蛋白层。

 5.应如何确定细胞因子的种属交叉活性?
1) 除少数例外,大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性。2) 许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞,但比活性可能低于对应的人类细胞因子。 3) IL-7等为数不多的人类细胞因子作用于小鼠细胞时比对应的小鼠细胞因子活性更强。4) 干扰素,GM-CSF, IL-3和IL-4等细胞因子种属特异,对非同源细胞几乎没有活性。5) 相反,成纤维细胞生长因子(FGFs)和神经营养素(neurotrophins)高度保守,在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。

 6.什么是载体蛋白?
载体蛋白如 HSA 或 BSA 用于提高重组蛋白的稳定性,并有助于避免产品粘在小瓶壁上。

 7.我应该如何储存重组蛋白?
对于长期储存,蛋白质溶液应与载体蛋白(例如 0.1% BSA 或 0.1% HSA)分装保存,并在 -20°C 下冷冻保存。请记住,每个冷冻/解冻循环都可能导致蛋白质变性。除非分析证书上另有说明,否则大多数重组蛋白的保质期为一年。如果将它们保存在分析证书上所述的最佳存储条件下,则提供此保证。

 8.如何确定重组蛋白的数量?为什么我的检测产生的蛋白质数量与您的结果不同?
我们通过BCA、SDS-PAGE、HPLC等方法确定重组蛋白的数量。不同的测定产生不同的量化结果。有时,如果您进行不同的检测,差异可能会很大。蛋白质也有可能在储存过程中形成聚集体,在重组和离心后导致损失。我们对每批产品进行质量控制测试,但是,同一批次中的一些小瓶可能与其他小瓶不同(这种情况很少发生)。

 9.如何区分重组蛋白、融合蛋白和天然蛋白
重组蛋白是利用基因工程技术产生的,通常是由转基因动物的乳腺产生,其作为生物制药在医学领域中作用显著。利用基因工程技术,可以使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂”。方法:是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射等方法,导入哺乳动物(哺乳动物才会泌乳)的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品,因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。

融合蛋白又称为“标签蛋白”,常用的标签有His、GST、Strep标签。融合蛋白是通过DNA重组技术将要表达的目的蛋白基因和表达载体上融合蛋白基因相连,通过这种方式表达出来的蛋白质,就是既含有目的基因蛋白又含有融合基因蛋白的重组蛋白。融合蛋白表达是重组蛋白表达的一种策略,融合表达是一种方法。

天然蛋白质是在自然界中存在的,不经过人工的任何修饰或加工,比如大豆中的蛋白质和病毒表面的蛋白质。

 
 
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