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色谱柱固定相填充方法与技巧
色谱柱在色谱仪分析检测过程中起着分离样品组分的作用，其分离度直接影响色谱仪检测的灵敏度和速率。影响色谱柱分离度的因素包括固定相和流动相的选择、流速和温度的控制、理论塔板高度和塔板数、对称因子、容量因子和选择性因子的重复性。其中，组分在色谱柱上的分离效果,主要取决于用在填充色谱柱的固定相。固定相填充质量的好坏直接影响填充柱的柱效，因此，色谱柱固定相的填充方法也是很重要的。一根填充质量较高的色谱柱，通常其理论塔板数应该达到2000-3000/m，根据填充物粒度的大小，可分为湿法装柱和干法装柱。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂"走柱子"，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂"走柱子"，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
湿法装柱和干法装柱这二者各有优劣，不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。为了获得最佳的填充密度，可选择适当的加压、减压或是手工填充的方法进行填充色谱柱。
（1）加压法
加压法是将填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉，另一端与填料池连接。先将固定相倒入填料池，填料池的另一端出口与氮气或空气钢瓶的减压阀连结。对于常见内径为4.5mm的填充柱，可调节气流为30ml/min（气流应随内径大小作相应调整），将填充池内的固定相压入填充柱中，同时用木棒轻敲填充柱体使固定相填充均匀。装柱要求要填充得均匀，紧密，切忌有空隙。固定相填充完毕后，在原来连接填充池的一端塞上硅烷化的玻璃棉，注意这一端应该与色谱仪的进样室相连接，另一端作为出口端与检测器相连接，不能接反。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。
（2）减压法
减压法一般用于填充长柱子。这个方法采用真空泵抽气，将填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉后与真空泵的缓冲安全瓶相连接。为了防止抽气时潮湿空气进入而使固定相性能受影响，可以在填料池加入固定相后，在入气口接氯化钙和硅胶干燥塔，其他操作过程与加压填充法相同。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。
（3）手工填充法
手工填充法一般只用于某些涂有沸点较低固定液的固定相的填充。通常采用边装边敲打的办法。每次加进柱内的填料约5cm。填充时应注意两点：一是固定相要填充均匀和紧密适度，柱内不留有死空间或者间隙；二是要避免填充过程中敲打振动过猛，造成固定相机械粉碎。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长。